轉錄組測序(RNA-Seq)

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轉錄組(Transcriptome)是指一個活細胞所能轉錄出來的所有RNA的總和,是研究細胞表型和功能的一個重要手段。轉錄組學(Transcriptomics)是使用高通量測序技術,全面快速獲取某一物種特定組織或器官在某一狀態下RNA序列信息,并對其結構和表達信息進行分析??捎糜陬A測基因結構、可變剪切和其他轉錄修飾,并可定量測定每個轉錄本在生長過程中和不同條件下表達水平的變化。

(Schematics of RNA-Seq workflow. Wang Y et al., Bioinformatics. 2011)

麥特繪譜可提供的技術服務:

1)真核有參轉錄組測序

真核生物轉錄組測序可以分為有參和無參的情況。真核有參轉錄組測序,指對已有參考基因組的真核生物或其組織、細胞等進行轉錄組測序。通過與參考基因組比對,可驗證轉錄組測序的測序飽和度和基因覆蓋度,同時可獲得基因結構、基因表達差異,和可變剪接等信息。

2)真核無參轉錄組測序

真核生物轉錄組測序可以分為有參和無參的情況。真核無參轉錄組測序,指在無參考基因組的情況下,對真核生物轉錄組進行測序。真核無參轉錄組測序在獲得原始數據后,首先要進行質控拼接為unigene,再以unigene為參考序列進行后續分析,包括功能注釋、SNP、SSR標記開發等。也可以對多個樣本進行差異基因表達分析和差異基因功能富集分析等,用于發現功能基因,為下一步研究提供方向。

3)原核轉錄組測序

原核轉錄組測序可以從基因表達量、基因結構和sRNA調控功能三維度揭示不同生物性狀的分子調控機制。如通過計算各組間的差異基因并對差異基因進行富集分析,獲得對生物性狀影響較大的通路信息;通過預測基因的反義轉錄本,豐富基因組注釋內容;研究sRNA對mRNA的相互作用,從分子調控角度解釋生物性狀之間的差異。

4)全轉錄組測序

全轉錄組即特定細胞或組織在某一功能狀態下轉錄產物 (mRNA、 LncRNA、 CircRNA 以及 microRNA) 的合集。全轉錄組測序可對同一個樣品同時進行 mRNA、 LncRNA、 CircRNA 和 microRNA 的單獨分析,還可進行多種 RNA聯合分析以及內源競爭性 RNA 整合分析,分子標記篩選等,探究其潛在的調控網絡機制,揭示轉錄調控問題。主要應用于免疫機制、疾病領域、發育進化、致病機理和藥物靶標等方面的研究。

5)三代全長轉錄組測序

基于三代測序平臺的全長轉錄組測序,可直接獲取mRNA全長序列,更為準確地解讀mRNA結構信息,重點關注基因的可變剪切、融合基因等。應用領域:獲得基因組未知物種的基因集,用于基因功能研究;基因結構差異分析;發現新轉錄本;分子機制研究;基因表達調控研究等。

樣本量推薦:

組織:200 mg

細胞:10E6

細菌:濕重0.2g